眼組織透射電子顯微鏡制樣方法
介紹一種眼組織透射電子顯微鏡標(biāo)本制備方法,。組織先用4%多聚甲醛—2.5%戊二醛混合固定液預(yù)固定,，1%四氧化鋨固定液后固定,，丙酮逐級(jí)脫水,，延長(zhǎng)Epon812包埋液的浸透時(shí)間并包埋,，用玻璃刀或鉆石刀作超薄切片，醋酸鈾及枸椽酸鉛雙重染色,。 材料 將大白鼠麻醉或斷頭后,，立即摘去眼球，并保留視神經(jīng),，其過程在2 min之內(nèi)完成,。 方法 1 取材與預(yù)固定 將摘出的眼球用0.1 M磷酸緩沖液(pH7.2～7.4)洗凈表面的血液，立即浸入4%多聚甲醛—2.5%戊二醛混合固定液中,，用4號(hào)針頭沿赤道部將眼球打一小孔,，將針頭輕輕退出約1 mm，用空針緩緩?fù)迫腩A(yù)固定液,，在預(yù)固定12h后,，沿赤道部將眼球割成二半，分別取出各種組織,，組織切成1 mm3大小,，繼續(xù)固定2 h，然后用3%EDTA-Na2軟化20 min,。 2 清洗 0.1M磷酸緩沖液反復(fù)清洗5次,，每次10～20 min，并浸泡過夜,。 3 后固定 1%四氧化鋨固定液固定2 h(4 ℃),。 4 脫水 用30%、50%,、70%的丙酮各脫水5～10 min(4℃),，90%的丙酮脫水10～15 min(室溫)，100%丙酮脫水40 min(換三次),。 5 浸透 用Epon812包埋液+丙酮(3∶1)浸泡45 min(35 ℃),；純Epon812包埋液浸泡2 h(45 ℃)。 6 包埋 將經(jīng)以上步驟處理的樣品,，放置定向包埋模具中,，方向應(yīng)為保持所需眼組織的全層結(jié)構(gòu)為準(zhǔn)。加入新鮮的Epon812包埋液，使組織完全浸泡于包埋液中,。 7 聚合在45 ℃下聚合10 h,，在60 ℃下聚合12 h。 8 修塊,、半薄切片,、超薄切片、染色 按常規(guī)進(jìn)行,，H600-Ⅳ型透射電鏡觀察,。 優(yōu)點(diǎn) 用該方法制備的樣品，包埋塊硬度適當(dāng),，無過硬過脆現(xiàn)象,，在切片過程中，切片韌性較好,，切片厚度可達(dá)500～600 nm,，切片顏色為淺黃色，無散片現(xiàn)象,，包埋液浸透良好,。
