眼組織透射電子顯微鏡制樣方法
介紹一種眼組織透射電子顯微鏡標本制備方法,。組織先用4%多聚甲醛—2.5%戊二醛混合固定液預固定,，1%四氧化鋨固定液后固定,，丙酮逐級脫水,，延長Epon812包埋液的浸透時間并包埋,，用玻璃刀或鉆石刀作超薄切片,，醋酸鈾及枸椽酸鉛雙重染色,。 材料 將大白鼠麻醉或斷頭后,，立即摘去眼球,，并保留視神經(jīng)，其過程在2 min之內(nèi)完成,。 方法 1 取材與預固定 將摘出的眼球用0.1 M磷酸緩沖液(pH7.2～7.4)洗凈表面的血液,，立即浸入4%多聚甲醛—2.5%戊二醛混合固定液中,，用4號針頭沿赤道部將眼球打一小孔，將針頭輕輕退出約1 mm,，用空針緩緩推入預固定液,，在預固定12h后，沿赤道部將眼球割成二半,，分別取出各種組織,，組織切成1 mm3大小，繼續(xù)固定2 h,，然后用3%EDTA-Na2軟化20 min,。 2 清洗 0.1M磷酸緩沖液反復清洗5次，每次10～20 min,，并浸泡過夜,。 3 后固定 1%四氧化鋨固定液固定2 h(4 ℃)。 4 脫水 用30%,、50%,、70%的丙酮各脫水5～10 min(4℃)，90%的丙酮脫水10～15 min(室溫),，100%丙酮脫水40 min(換三次),。 5 浸透 用Epon812包埋液+丙酮(3∶1)浸泡45 min(35 ℃)；純Epon812包埋液浸泡2 h(45 ℃),。 6 包埋 將經(jīng)以上步驟處理的樣品,，放置定向包埋模具中，方向應為保持所需眼組織的全層結構為準,。加入新鮮的Epon812包埋液,，使組織完全浸泡于包埋液中。 7 聚合在45 ℃下聚合10 h,，在60 ℃下聚合12 h,。 8 修塊、半薄切片,、超薄切片,、染色 按常規(guī)進行，H600-Ⅳ型透射電鏡觀察,。 優(yōu)點 用該方法制備的樣品，包埋塊硬度適當,，無過硬過脆現(xiàn)象,，在切片過程中，切片韌性較好,，切片厚度可達500～600 nm,，切片顏色為淺黃色,，無散片現(xiàn)象，包埋液浸透良好,。
